RT-PCR-testi
"Skabe noget ud af ingenting": PCR-tests, CT-værdier og falske positiver
Niels Harrit PhD
27. toukokuuta 2021
Jos rokotusta voidaan käyttää Corman-Drosten RT-PCR -testin varmentamiseen Covid-19:lle, noin 50 % raportoiduista positiivisista tuloksista on katsottava vääriksi, kun käytetään enintään 35 sykliä. Jos käytetään vain 25 sykliä, väärien positiivisten osuus putoaa 20 prosenttiin.
RT-PCR-testin tehokkuus, jota käytetään SARS-CoV-2-viruksen aiheuttaman infektion ja Covid-19-taudin "tapausten" tunnistamiseen, on laajalti kiistanalainen. Näissä keskusteluissa väitetään usein, että testi tuottaa 97 % vääriä positiivisia tuloksia. Tämän väitteen viitteenä on Marseillen ryhmän tutkimus, joka julkaisi tuloksensa kirjeessä Oxfordin akatemialle (https://academic.oup.com/cid/article/72/11/e921/5912603) 28. syyskuuta 2020. [1]
Ensimmäinen kirjoittaja on R. Jaafar, joten sitä kutsutaan jatkossa Jaafar-artikkeliksi. Se edustaa laajennettua tietojoukkoa verrattuna aiempaan B. La Scolan johtamaan tutkimukseen. Tätä julkaisua kutsutaan La Scola -artikkeliksi.
Kaiken kaikkiaan Jaafar-artikkelissa esitetyt tulokset eivät itsenäisesti todista, että testi tuottaisi 97 % vääriä positiivisia tuloksia. Tämä kommentti on yritys poimia olennaiset johtopäätökset heidän tiedoistaan.
RT-PCR-lyhenteen ympärillä on myös ollut hämmennystä. Sitä kutsutaan joskus nimellä "Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction" (käänteiskopioija-polymeraasiketjureaktio), kun taas toisinaan se selitetään "Real Time PCR" (reaaliaikainen PCR).
Se on molempia. Kyseessä on reaaliaikainen RT-PCR.
Käänteiskopioijaentsyymi käsittelee näytteen yksijuosteisen RNA:n ja muuntaa sen kaksijuosteiseksi DNA:ksi useissa vaiheissa. Tämän jälkeen polymeraasientsyymi alkaa tuottaa kopioita valitusta DNA:sta. Valinta määräytyy niin sanottujen alukkeiden (primereiden) perusteella, jotka ovat välttämättömiä prosessin käynnistämiseksi.
Kopiointi tapahtuu sykleissä. Jokainen sykli alkaa näytteen lämmittämisellä, jotta DNA:n kaksoiskierre hajoaa kahdeksi vapaaksi DNA-juosteeksi. Nämä toimivat mallina polymeraasille, joka tuottaa kullekin komplementaarisen juosteen keitoksessa присутствующих rakennuspalikoiden avulla.
Jäähdytyksen myötä juosteet yhdistyvät uudelleen. Sykli on valmis. Tuloksena on DNA-molekyylien määrän kaksinkertaistuminen ennen syklin alkua.
Tuotannon aikana DNA merkitään koetinmolekyylillä, joka fluoresoi vain, kun se on sisällytetty DNA:han. Näyte siis emittoi näkyvää valoa, kun sitä valaistaan pienellä laserilla. Fluoresenssin intensiteetti tallennetaan jokaiselle PCR-syklille mittarina tuotetun DNA:n määrästä. Tässä kohtaa reaaliaikaisuus tulee kuvaan. Kun ennalta määrätty taso on saavutettu, monistamisprosessi pysäytetään, ja testi luokitellaan "positiiviseksi".
Syklien määrä, joka vaaditaan kriittisen fluoresenssitason saavuttamiseen, kutsutaan syklikynnykseksi (Ct), joka on jokaisen näytteen ominaisuus. On selvää, että jos prosessi alkaa suurella määrällä RNA-fragmentteja, kynnysfluoresenssi saavutetaan aikaisin, ja Ct-arvo on matala. Jos alkuperäinen viruskuorma on vain muutama RNA-molekyyli, tai ehkä jopa vain yksi, voi kestää monia syklejä, ennen kuin kriittinen fluoresenssisignaali saavutetaan.
Tämä tarkoittaa, että Ct-arvo voi potentiaalisesti tarjota kvantitatiivisen mittauksen henkilön viruskuormasta. Se voi olla hyödyllistä, jos haluat kvantitatiivisen arvion väliaikaisesta tilastasi.
Tulevaisuuden keskustelu voisi kuulostaa tältä:
"Miten voit?"
"Kävin testikeskuksessa. He sanoivat, että olen kunnossa. Minulla on tänään Ct-arvo 42."
Kuten seuraavasta käy ilmi, tämä vuoropuhelu voi tarkoittaa, että henkilö #2:lla oli flunssa viime syksynä, mutta ei kliinisiä oireita tänään. Kaikki näytteet ovat positiivisia, jos käytetään 60 sykliä, koska "PCR tekee jotain tyhjästä", kuten Kary Mullis – PCR-teknologian keksijä ja Nobel-palkinnon saaja – kerran sanoi.
Kun kyse on vain sykleistä ennen kuin testi on positiivinen, meillä kaikilla on oltava kehossamme DNA- ja/tai RNA-fragmentteja – ulkomaisia tai kotimaisia – joita nykyiset alukkeet kohdistavat. Korkeilla Ct-arvoilla päädyt vahvistamaan "taustamolekyylikohinaa" vaarattomista geneettisistä fragmenteista.
Toivottavasti tämä käännös on hyödyllinen!
MEILLÄ KAIKKI ON CT KOKO AIKA!
Jaafarin artikkeli on panos tärkeään keskusteluun PCR-metodologian terapeuttisesta hyödyllisyydestä. Tarkemmin sanottuna: "Mikä on Ct:n kääntöpiste, jonka alapuolella PCR tarjoaa mielekkään testin Covid-19:lle ja jonka yläpuolella se on merkityksetön"?
Covid-19-epidemian alusta tämän julkaisun tutkimuksen loppuun saakka Marseillen instituutti suoritti 250 566 SARS-CoV-2 -testiä 179 151 potilaalle.
Näistä 13 161 oli positiivinen 35 RT-PCR-syklin sisällä. Se on 7,3 prosenttia.
Näistä positiivisista näytteistä 3790 siirrostettiin ja käsiteltiin viljelyä varten. Rokotusprosessi on enemmän tai vähemmän kuvattu La Scola -artikkelissa.
He kirjoittavat, että "0,5 ml vanupuikkonestettä sentrifugoitiin ja siirrostettiin VERA-soluihin (apinan munuaissolulinja) ja havaittiin sytopaattinen vaikutus" - määrittelemättömän määrän päiviä.
Eli kuolivatko solut ja hajosivatko ne? Tämä havainto on täytynyt tehdä optisen mikroskoopin alla. Jos he havaitsivat solukuoleman, pullosta otettiin nestenäyte ja käsiteltiin sitten tarkkailua varten pyyhkäisyelektronimikroskoopilla.
Kirjoittajat kutsuvat tätä "viruksen oletettavaksi havaitsemiseksi supernatantissa, joka osoittaa sytopatogeenisen vaikutuksen".
Kuvia elektronimikroskoopista ei kuitenkaan esitetty.
Viruksen läsnäolo "varmistetaan" edelleen tämän nesteen RT-PCR:llä. Erittäin tärkeää on, että näiden RT-PCR:ien Ct-arvoja, jotka on suoritettu näytteillä, joille on suoritettu elektronimikroskopia, ei anneta. Jos alukkeiden valitsema DNA/RNA ennen inokulaatiota ja sen jälkeen kohdistui samaan virukseen, lopullisten Ct:iden tulisi olla merkittävästi alhaisempia kuin raa'ista pyyhkäisyistä saadut Ct:t. Jos he eivät olisi, emme todellakaan tiedä miksi solut kuolivat.
Mutta oletetaan nyt, että solukuolema on onnistuneen rokotuksen kriteeri ja että kuolemat johtuvat samasta viruksesta, joka on kvantifioitu RT-PCR-testissä.
Siten Jaafar et ai. raportoivat, että siirrostus onnistui 1941 tapauksessa 3790:stä viljelystä käsitellystä PCR-positiivisesta. Tämä johtaa meidät välittömään arvioon, että 49 % positiivisista PCR-testeistä saattoi olla vääriä siinä mielessä, että potilaan viruskuorman on täytynyt olla merkityksetön.
Se, edustavatko 51 % onnistuneesti rokotetuista näytteistä todella positiivista diagnoosia Covid-19-nimiselle taudille, riippuu siitä, onko SARS-CoV-2 todella ainutlaatuinen kokonaisuus ja onko se eristetty ja osoitettu patogeeniseksi.
Tästä syystä pidätämme tässä arvioinnissa merkinnän "positiivinen" näytteelle, joka saavuttaa kriittisen fluoresenssikynnyksen. "Positiiviset" sisältävät inokuloitavat ja ei-inokuloitavat näytteet (jotka ovat vääriä positiivisia).
Jaafar-artikkelin tiedot on toistettu kuvassa 1. Se näyttää jakauman inokuloitavien ja ei-inokuloitavien näytteiden välillä kussakin Cts-ryhmässä 11 (Ct11) - 37 (Ct37) syklin välillä.
Kyllä, inokuloitavat aineet muodostavat vain 3 % Ct35-ryhmästä. Koska tähän mennessä oli kuitenkin otettava vain 74 näytettä, tämä ei tarkoita, että RT-PCR-testi tuottaa yleensä 97 % vääriä positiivisia tuloksia. Kuva on monipuolisempi.
Samat tiedot esitetään perinteisemmällä tavalla kuvassa 2.
Etsimme vastausta kysymykseen: Kuinka monta sykliä pitäisi olla vakio, jos haluamme, että 80 % positiivisista edustaa rokotettavaa näytettä?
Kuvassa 3 (vasemmalla) inokuloitavien ja ei-inokuloitavissa olevat näytteet Ct-arvoon asti. Eli kuvion 2 käyrät on integroitu.
Kuvassa 3 (oikealla) samat tiedot on esitetty prosentteina viljeltyjen näytteiden kokonaismäärästä Ct:hen asti.
Nähdään, että Ct25:ssä 80 % RT-PCR-testissä "positiivisiksi" kutsutuista näytteistä on rokotettavissa. Kuitenkin 20 % "positiivisista" on vääriä, jos inokulaatio on RT-PCR:n tehokkuuden vertailukohta. Jotkut saattavat pitää sen hyväksyttävänä.
Joten jos 1) jotain ainutlaatuista SARS-CoV-2-virusta on olemassa, jos 2) tämä virus aiheuttaa vakavia hengitystieoireita, jos 3) virus on rokotettavissa VERA-soluissa, jos 4) VERA-solut ovat oikea esitys ihmisistä ja jos 5) Corman-Drosten-testi todella havaitsee SARS-CoV-2-viruksen, sillä voi olla joitain etuja kliinisen hoidon oireiden vuoksi, kunnes potilas on lääkärissä 5 lisäkokeena.
Se on kuitenkin vähän kaukaa haettua, eikö?
Se todella tiivistyy alukkeisiin, niiden spesifisyyteen ja soveltuvuuteen alhaisilla pitoisuuksilla. Kuinka he voivat kohdistaa tappavan SARS-CoV-2-viruksen, kun sen olemassaoloa ei ole vielä todistettu? Lisäksi käytettyjen erilaisten alukkeiden sekvenssit eivät ole vain noin. 100 bakteeria, mutta niitä on runsaasti myös ihmisen genomissa.
Kahden DNA-säikeen pariutumisen - hybridisaation - ei tarvitse olla täydellinen tapahtuakseen. Jos nämä kaksi säiettä ovat vain 80 % toisiaan täydentäviä, sitoutumisvakio pienenee. Mutta hybridisaatiota tapahtuu joka tapauksessa. Kun tavanomaisessa Corman-Drosten-testissä käytetään räikeästi liioiteltua alukkeiden pitoisuutta, se on tarkoituksellisesti sidottu poimimaan ympäriinsä leijuvaa muuta DNA:ta riippumatta siitä, onko käänteiskopioijan tuottama vai ei.
EN RT-PCR-TEST KØRT VED CT25
Mitä tuloksia voidaan odottaa, JOS Corman-Drosten-testi havaitsi jotain nimeltä SARS-CoV-2 ja se ajettiin enintään 25 syklillä?
Tarkastellaan kuvassa 4 (vasemmalla), kuinka viljeltyjen näytteiden kokonaismäärä kasvaa osittain lineaarisesti syklien määrän kanssa. Tämä on yhdenmukainen sen näkemyksen kanssa, että kulttuurien määrä per Ct-ryhmä saavuttaa tasangon, joka ylittää Ct ~ 20 (kuva 2), mutta vain havaittavasti, jos viljelylle altistettujen näytteiden valinta oli satunnaista.
Tästä alaryhmästä (3790), jolle on suoritettu viljely - jotka on valittu RT-PCR-testissä positiivisiksi kutsutuista 35 syklin aikana - vain 1813 olisi kirjattu positiiviseksi, jos olisi käytetty vain 25 sykliä (kuva 4, vasen), mikä vastaa 48 % alaryhmästä (Kuva 4, oikea).
Koska 7,3 % testasi positiivisia RT-PCR:llä 35 syklin aikana, 7,3 x 0,48 = 3,5 % palautettaisiin positiiviseksi, jos syklien lukumäärä rajoitetaan 25:een.
Näistä 2,8 % voi olla uskottavia (80 % rokotuksen mukaan), kun taas 0,7 % voi olla vääriä positiivisia - JOS rokotus on kelvollinen varmistusmenetelmä ja kaikki muut ehdot täyttyvät!
LOPPUHUOM
Sairas oleminen tarkoittaa oireita. Jos et ole sairas, et ole tartunnan kantaja. Ennen oli terve järki, että olet terve, ellei toisin todisteta.
Maalaisjärki ei ole enää yleistä väitetyn Covid-19-pandemian aikana. Nyt olet sairas, kunnes toisin todistetaan - ja periaatteessa olet tarttuva. Tämän huijauksen väline on RT-PCR-testi, joka on suoritettu yli 35 syklillä. Lopeta testaus ja selviydy.